Zu den ältesten Kunstschätzen der Nikolaikirche, gehört die fast zweieinhalb Meter hohe in Stuck gefertigte Monumentalskulptur Anna Selbdritt, eine der bedeutendsten Großplastiken des Ostseegebietes zu jener Zeit. Die große Kirchenorgel aus dem 19. Jahrhundert von Carl August Bucholz mit ihren 55 Registern und mehr als 4000, zum Großteil noch originalen, Pfeifen ist ebenfalls ein Glanzstück der Kirche. Buchholz zählt zu den renommiertesten Orgelbauern des 19. Jahrhunderts. Bei dem Stralsunder Werk in der Kirche St. Nicolai handelt es sich um die größte von ihm erbaute Orgel im neogotischen Stil.
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